뷰렛 반응

뷰렛 반응은 5%의 수산화 나트륨용액(또는 수산화 칼륨)과 1%의 황산구리 수용액을 섞어서 만든 뷰렛 용액(푸른색)을 이용하여 단백질을 검출하는 반응이다. 뷰렛 용액에 단백질을 넣으면 단백질의 작용기인 펩티드사슬이 구리와 나트륨과 결합하여 형성되는 비스뷰타렛구리(II)산 나트륨(수산화 칼륨의 경우 비스뷰타렛구리(II)산 칼륨)을 생성하면서 색이 보라색으로 변한다. 색이 변하는 이유는 펩티드결합이 두 개 이상 존재하는 구조를 뷰렛이라 하는데, 이 뷰렛구조가 2가의 구리 이온과 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하기 때문이다. 모든 단백질은 기본적으로 무수히 많은 펩티드결합으로 이루어져 있기 때문에, 뷰렛반응으로 검출할 수 있다. 단백질 뿐 아니라 단 몇 개의 펩티드결합을 가지고 있는 펩티드도 검출할 수 있다.

실험

시약 제조

1L들이 부피 플라스크에 CuSO₄ 1.6g을 넣고 눈금선까지 증류수를 채워 0.01M 의 황산구리 수용액을 만든다.

1L들이 부피 플라스크에 NaOH 400g을 넣고 마찬가지로 눈금선까지 증류수를 채워 10M의 수산화나트륨 수용액 1L를 만든다.

반응을 진행하기 전에 수산화나트륨수용액 1L와 황산구리수용액 약 25ml를 섞어 뷰렛시약을 만들어 사용하거나 실험을 두 과정으로 나누어서 진행한다. 더 간단하게는 5% 수산화나트륨용액과 1% 황산구리수용액을 각각 몇 방울씩 시료에 떨어뜨려 검사하기도 한다. 두 용액을 미리 섞어 두면 반응이 일어나므로 검출 직전에 혼합하여 사용하는 것이 좋다.

검출 과정

1. 검사하고자 하는 단백질 시약을 준비한다.
2. 5%(10M) 수산화 나트륨 수용액을 넣는다.
3. 1%(0.01M) 황산구리 수용액을 넣는다
4. 색이 보라색으로 바뀌면 단백질이 검출된 것이다.

원리

뷰렛반응 시약 속에는 2가의 구리이온(Cu²⁺)이 들어 있기 때문에 푸른색을 띤다. 시약이 단백질과 만나면 보라색으로 색이 변하는 성질을 이용하여 단백질의 검출에 사용한다.

색이 변하는 이유는 펩티드 결합이 두 개 이상 존재하는 구조를 뷰렛이라 하는데, 이 뷰렛구조가 2가의 구리 이온과 반응하여 보라색의 착화합물을 형성하기 때문이다. 모든 단백질은 기본적으로 무수히 많은 펩티드 결합으로 이루어져 있기 때문에, 뷰렛반응으로 검출할 수 있다. 단백질 뿐 아니라 단 몇 개의 펩티드결합을 가지고 있는 펩티드도 검출할 수 있다.

같이 보기

• 구리폴린법(copper-Folin method)
• 단백질